Avaliação histomorfométrica da associação do concentrado sanguíneo Fibrina Rica em Plaquetas (PRF) com substituto ósseo: estudo piloto

Resumo

Introdução: com o avanço da medicina regenerativa, novas abordagens de reparo tecidual estão sendo desenvolvidas.  O concentrado sanguíneo de segunda geração proposto por Choukroun em 2001, Fibrina Rica em Plaquetas (PRF), consiste em uma matriz autóloga de fibrina, disposta em arquitetura tridimensional, capaz de reter uma ampla variedade de células, plaquetas, fatores de crescimento e citocinas que potencializam o reparo dos tecidos. Recentemente, foi proposta a terceira geração de concentrados sanguíneos, com base em um protocolo progressivo de centrifugação. O PRF Progressivo (PRO-PRF - 60g/5min, 200g/5 min e 700g5min) é produzido em tubos de plástico sem aditivos e obtido, inicialmente, em consistência fluida. A polimerização do coágulo é estimulada por contato direto com recipiente de vidro, seguida de prensagem final para obtenção de membranas com maior resistência à tração, controle dimensional e fácil incorporação de biomateriais. A biofuncionalização de materiais sintéticos com produtos biológicos autólogos, com o propósito de potencializar o efeito regenerador, é de grande interesse clínico. No entanto, a literatura é inconsistente quanto às vantagens terapêuticas. Objetivo: o objetivo do presente estudo consistiu em avaliar o padrão de distribuição de partículas de hidroxiapatita sintética (HA) associadas a diferentes protocolos de PRF e a relação de proporção PRF/HA, por meio de microscopia de luz. Metodologia: participaram do estudo quatro indivíduos saudáveis que não haviam feito uso de medicamentos anti-inflamatórios, anticoagulantes ou antibióticos nos três meses anteriores ao estudo, não estavam em período de gestação ou lactação, não possuíam histórico de doença periodontal ou infecções sistêmicas ativas, e não eram fumantes. Mediante a aprovação do Comitê de Ética em Pesquisa (CEP-UFU) e a assinatura de Termo de Consentimento Livre e Esclarecido, foram coletadas aproximadamente 48ml de sangue por venopunção, dispensados em 6 tubos de plástico sem aditivos. Dois tubos foram destinados a cada um dos seguintes protocolos: 700g/12min (LPRF), 350g/15min (GM350) e centrifugação progressiva (60g/5min, 200g/5min e 700g/5min - PRO-PRF). Após a centrifugação, o conteúdo sobrenadante acima das hemáticas foi aspirado com agulha e seringa (~4ml) e dispensado em recipientes de vidro com cerca de 0,25g de HA (Alobone poros, Ossecon Biomateriais Ltda., Rio de Janeiro/RJ). Após a polimerização, os coágulos com HA foram prensados no dispositivo PRF-box e, em seguida, fixados em Karnovsky modificado durante 24h.  As amostras foram processadas para inclusão em metacrilato e os cortes, com cerca de 100μm de espessura, foram corados em azul de toluidina. Os cortes foram avaliados por microscopia de luz, considerando a área (porcentagem - %) ocupada pelo concentrado sanguíneo e pelas partículas de HA. As imagens histológicas foram visualizadas usando o software Aperio ImageScope (Copyright © Aperio Technologies, Inc. 2003–2014) com ampliação de 10x. Três imagens foram adquiridas de cada amostra, e a proporção PRF/HA foi calculada usando o software ImageJ (versão 1.52). Por fim, os dados foram submetidos ao teste de normalidade de Shapiro-Wilk e à Análise de Variância One-way. Diferenças foram consideradas estatisticamente significativas com α < 0,05. Resultados: não foram observadas diferenças significativas em relação à porcentagem de HA entre os protocolos LPRF (37,31 ± 4,08), GM350 (40,58 ± 8,00) e PROPRF (40,30 ± 5,83; p=0,579). Conclusão: a biofuncionalização de partículas de HA com PRF se dá em proporções semelhantes. No entanto, pesquisas adicionais, que avaliem o grau de ligação e contato na área de superfície da HA são necessárias.