Expressão de H3K9ac e H3K27ac em lesões epiteliais na língua de camundongos Nos2+/+ e Nos2-/- tratados com 4NQO

Resumo

Introdução: O óxido nítrico é um importante regulador do panorama epigenético de estados celulares homeostáticos e patológicos, nos quais as modificações pós-traducionais das enzimas moduladoras do epigenoma são o mecanismo mais bem descrito. Em vários tipos de câncer, o óxido nítrico atua ora promovendo, ora inibindo o crescimento tumoral. A síntese de óxido nítrico depende de três enzimas de uma mesma família, denominadas óxido nítrico sintases: neuronal (nNOS), induzível (iNOS) e endotelial (eNOS). As isoformas neuronal são classificadas como enzimas constitutivas em função de sua atividade contínua e dependente de cálcio e calmodulina, sintetizando concentrações baixas e transitórias de óxido nítrico. Em contrapartida, a iNOS é uma isoforma induzível e independente de cálcio, cuja síntese de óxido nítrico é contínua e caracterizada por concentrações elevadas, geralmente em processos patológicos, como durante a resposta inflamatória e a carcinogênese. Nos últimos anos, a literatura tem evidenciado o papel do óxido nítrico e das óxido nítrico sintases na manutenção direta da “paisagem” epigenética, atuando através de vários mecanismos, incluindo modificações pós-traducionais de histonas, metilação de DNA e regulação de microRNAs. Objetivo: O objetivo deste estudo é a análise da expressão imuno-histoquímica de marcadores epigenéticos relacionados à acetilação de histonas, a saber, H3K9ac (acetilação da lisina 9 da histona 3) e H3K27ac (acetilação da lisina 27 na histona 3), nos diversos estágios do processo de carcinogênese oral induzido por N-óxido de 4-nitroquinolina (4NQO) em camundongos selvagens Nos2+/+ e knockout para a enzima iNOS (Nos2-/-). Materiais e métodos: Nossa unidade experimental consistiu em camundongos machos Mus musculus das linhagens C57Bl/6J (tipo selvagem, Nos2+/+), animais selvagens que expressam o gene da óxido nítrico sintase induzível (iNOS) e B6.129P2-Nos2tm1Lau/J (knockout, Nos2-/-), que são camundongos geneticamente modificados que não expressam gene da iNOS. Eles foram tratados com a substância 4NQO em água de beber a 50μg/mL por 16 semanas e, posteriormente, observados por 8 semanas. As línguas foram submetidas a análise histopatológica para a classificação das lesões displásicas e neoplásicas, bem como a ensaio imuno-histoquímico para expressão de H3K9ac e H3K27ac. A reação antígeno-anticorpo foi analisada com o método de quickscore (QS). Os procedimentos experimentais foram aprovados pela Comissão de Ética em Experimentação Animal (CEUA-UFU, registro nº 100/18). Resultados: Observou-se que ambos os marcadores de acetilação de histonas foram expressos no epitélio normal. Os valores de QS foram maiores na displasia moderada dos camundongos Nos2-/- (p=0,025) em comparação com os Nos2+/+, e a displasia leve apresentou valores mais baixos para H3K9ac quando comparada à displasia moderada e grave no grupo Nos2-/- (p=0,015). A H3K27ac aumentou significativamente da mucosa normal para a displasia leve nos camundongos Nos2+/+ (p=0,007). Além disso, os camundongos Nos2+/+ tiveram um maior número de displasias leves positivas para H3K27ac em comparação com os Nos2-/- (p=0,023). Conclusão: O padrão de acetilação da histona H3 varia significativamente durante o processo de carcinogênese bucal em modelo murino, especialmente quando o revestimento epitelial da língua se torna displásico. Considerando as diferenças na expressão dos marcadores entre animais selvagem e knockout, podemos concluir que tais modificações epigenéticas podem ser mediadas pelo óxido nítrico sintase induzível.